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丙酮酸含量檢測試劑盒說明書

丙酮酸(PA)含量檢測試劑盒 

Pyruvic Acid (PA) Content Assay Kit

丙酮酸含量檢測試劑盒說明書圖1

丙酮酸含量檢測試劑盒說明書產品描述:

丙酮酸(Pyruvic Acid)是生物代謝及物質轉化的重要中間體,可通過乙醛 CoA 和三羧酸循環實 現體內糖、脂肪和氨基酸間的相互轉化,在營養物質代謝過程中起著重要的樞紐作用。丙酮酸分子中 同時具有羰基和羧基兩個官能團,除具有羧酸和酮的性質外,還具有 α-酮酸的性質,作為一種基本化 工原料在化學、制藥、食品、農業及環保等領域具有廣泛應用。 丙酮酸能夠與 2,4-二硝基苯肼反應生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中進一步被氧化為棕 紅色物質,產物在 520 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可定量檢測丙酮酸的含量。


丙酮酸含量檢測試劑盒說明書產品內容圖示:

丙酮酸含量檢測試劑盒說明書圖2


丙酮酸含量檢測試劑盒說明書產品使用說明:

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調式移液器、臺式離心機和蒸餾水。

①組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離心 10 min,取上清待測。 

②細菌或細胞:離心收集細菌或細胞到離心管內,按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 20%,超聲 3 s,間隔 10 s,重復 30 次),室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離心 10 min,取上清待測。 

③血清(漿)、培養液等液體樣本:按照樣本體積(mL):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比 例(建議 0.1 mL 液體樣本加入 1 mL 提取液)處理樣本,充分混勻后室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離 心 10 min,取上清待測。


丙酮酸含量檢測試劑盒說明書測定步驟說明:

①分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長至 520 nm,蒸餾水調零。

②在 96 孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑。

丙酮酸含量檢測試劑盒說明書圖3


吸光值測定:測定 520 nm 處吸光值,記為 A 測定、A 標準和 A 空白,計算?A 測定=A 測定-A 空白,?A 標準=A 標準-A 空白。注:空白組只需測定 1-2 次。 標準曲線的建立:以 100、50、25、12.5、6.25、3.125 μg/mL 為橫坐標(x),以其對應的?A 標準 為縱坐標(y),繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,將?A 測定帶入公式中得到 x(μg/mL)


丙酮酸含量檢測試劑盒說明書丙酮酸含量計算圖示:

丙酮酸含量檢測試劑盒說明書圖3

注釋:V 樣:反應體系中加入待測樣本的體積,75 μL=0.075 mL;V 提:待測樣本總體積,1 mL; V 液:液體樣本的體積,0.1 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;細菌或細胞數量: 以萬計。


丙酮酸含量檢測試劑盒說明書注意事項 

①血液樣本抗凝劑建議使用肝素鈉-氟化鈉,抗凝血樣品置于冰浴中送檢,盡快分離血漿。

②若 ΔA 測定超出標準線性吸光范圍,建議適當增加樣本(低于標準下限)或適當稀釋(高于標 準上限)后再進行測定,計算時相應修改。


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文章來源:http://www.zuibbs.cn/newss-170.html


 

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